Бактериологическое исследование

Бактериологическое исследование – способ проверки биоматериала на наличие

возбудителя инфекционного заболевания. Метод бакпосева позволяет выявить и идентифицировать патогенный микроорганизм даже при относительно малых его концентрациях в тканях. Для этого исследуемые образцы высевают на питательные среды и культивируют для получения визуально видимых колоний возбудителя. Полученные штаммы бактерий типируют и проверяют на устойчивость к антибиотикам.

Бактериологическое исследование – способ проверки биоматериала на наличие

возбудителя инфекционного заболевания. Метод бакпосева позволяет выявить и идентифицировать патогенный микроорганизм даже при относительно малых его концентрациях в тканях. Для этого исследуемые образцы высевают на питательные среды и культивируют для получения визуально видимых колоний возбудителя. Полученные штаммы бактерий типируют и проверяют на устойчивость к антибиотикам.

На заметку! Бактериологические методы исследования уступают по точности иммуноферментному анализу (ИФА) и полимеразной цепной реакции (ПЦР), но в отличие от них, с высокой точностью определяют степень чувствительности выделенных штаммов бактерий к группам антибиотиков. Полученный результат позволяет подобрать максимально эффективное лечение и скорректировать дозы лекарств.

Процедура занимает несколько суток (48-72 часа).

В каких случаях используют бактериологический метод

Исследование проводят для диагностики инфекционных заболеваний с хроническим (реже – острым) течением. Локализация и степень поражения может быть различной. Общие примеры:

• ЗППП и инфекции мочевыделительной системы – хламидиоз, трихомониаз, микоплазмоз и др.;
• кишечные инфекции – дизентерия, брюшной тиф, сальмонеллез;
• хронические поражения органов дыхательной системы – синуситы, тонзиллиты, бронхиты, пневмонии;
• гнойные процессы различной локализации, в том числе гнойничковые поражения кожи. В данном случае определение чувствительности микроорганизма к антибиотикам особенно актуально;
• дисбактериоз слизистых структур – кишечника, половых органов, ротовой полости. Методика позволяет не только выявить патогенных и условно-патогенных возбудителей, но и сделать заключение о составе здоровой микрофлоры;
• сепсис – общее заражение крови.

Последовательность действий и особенности методики

Для проведения бактериологического исследования необходимо выполнить сбор материала и культивировать его на питательных средах с последующей микроскопией полученных штаммов и проверкой чувствительности к антибиотикам.

Сбор материала

Биоматериалом для исследования могут служить кровь, моча, ликвор, мокрота, сперма, кал, мазки из глотки, влагалища, уретры, любые другие ткани и жидкости из области инфекционного процесса. Образцы собирают в асептических условиях, помещают в стерильную посуду и в течение 2-х часов доставляют в лабораторию. При необходимости пробы хранят при пониженных температурах.

Культивирование

Культивирование проводят с применением механических или биологических методов. Механический подход с использованием стандартных искусственных сред – наиболее распространенный. В данном случае для высевания образцов используют жидкие и твердые питательные составы. Наиболее распространенные – агар, мясо-пептонный бульон.

Посев материала производят с помощью специальной петли или пастеровской пипетки, растирая полученный образец по поверхности или вводя его в толщу питательной среды. Выделение бактерий производят из чистых культур, которые получают повторным посевом ранее выращенных колоний на новую среду.

Биологические методы подразумевают использование специальных питательных сред, которые учитывают особенности микроорганизма, в частности, чувствительность к некоторым химическим веществам, в том числе антибиотикам. В некоторых случаях применяют метод заражения лабораторных животных или тканевых культур с отслеживанием патологических изменений. Такой подход актуален при крайне незначительном накоплении микроба в тканях человека – в этом случае его выделение посевом на питательных средах не дает результата.

Микроскопическое исследование

Основной метод бактериологической диагностики – бактериоскопия. Она подразумевает визуальную оценку параметров микроорганизма под микроскопом. Для этого используют фиксированные и нефиксированные препараты.

Нефиксированные препараты позволяют исследовать живые образцы бактерий. Основные методы:

• раздавленная капля – образец придавливают между предметным и покровным стеклами;
• висячая капля – образец помещают в лунку на предметном стекле и герметично накрывают покровным.В качестве среды используют изотонический раствор или расплавленный агар. Методика позволяет наблюдать за живыми микроорганизмами в течение нескольких дней.

Фиксированные препараты используют для окрашивания с подробным изучением морфологических и некоторых биохимических параметров патогенов. Каплю бактериального состава размазывают по предметному стеклу и фиксируют пламенем горелки или специальными химическими составами.

Для определения свойств бактериальных препаратов используют ряд общих и специфических методик:

• микроскопия – определение формы, размеров, окрашивания по Граму;
• биохимические методы – исследование ферментативной способности микроорганизма к расщеплению тех или иных углеводов, аминокислот, метаболитов, в том числе способность к гемолизу, фибринолизу при попадании в кровь живых существ;
• серологические методы идентификации – реакции агглютинации под воздействием специфической сыворотки и другие антигенные свойства;
• биологические методы – заражение лабораторных ждивотных с проверкой патогенности и токсигенности взятых образцов, их устойчивости к антибиотикам.

Только совокупный анализ результатов всех методов диагностики – микроскопических, биохимических, серологических, биологических – дает объективный результат для вынесения точного диагноза.

Расшифровка результатов

Стандартный результат сводится к двум пунктам анализа:

• качественный анализ с определением факта наличия/отсутствия определенного возбудителя;
• количественный анализ с указанием числа микроорганизмов на единицу объема – выражают в КОЕ (колониеобразующие единицы). Чем выше этот показатель, тем сильнее бактериальное поражение организма данным возбудителем.

Внимание! Отрицательный результат является относительным и показывает отсутствие патогенных организмов лишь в отдельно взятой порции материала. Для большей объективности данных требуется повторное обследование.

Дополнительно указывают чувствительность микроорганизмов к основным классам антибактериальных средств – пенициллинам, тетрациклинам, цефалоспоринам, макролидам. Чем выше показатель чувствительности, тем успешнее будет лечение данным антибиотиком.

Что такое и как проводится бактериологический анализ воды?

Одним из видов анализа воды является ее бактериологическое исследование. Бактериологический анализ предусмотрен для определенных видов воды.

Он регламентируется различными документами, одним из которых является ГОСТ 18963-73. При анализе используется специальное оборудование.

Что это такое и какие цели исследования?

Бактериологический анализ является одним из способов оценки того, в каком количестве и какие конкретно виды бактерий присутствуют в воде.

Анализ имеет следующие цели:

• определение количества микроорганизмов, присутствующих в воде;
• оценка этого количества;
• выявление конкретных видов бактерий, находящихся в воде;
• проверка воды на наличие опасных для человека микроорганизмов;
• выбор оптимального варианта очистки воды.

Виды вод, для которых используют санитарно-бактериологический тест

Исследование на наличие микроорганизмов предусмотрено для следующих видов вод:

• водопроводная;
• из колодцев;
• из закрытых водоемов (прудах, котлованах);
• из рек, в которых предполагается купание людей;
• артезианская (добытые из скважин);
• грунтовые (взятые из подземных верхних слоев земли);
• родниковая;
• сточные.

Регламентирующие документы

Исследование воды на наличие микроорганизмов регламентируется ГОСТами и СанПиНами. Основным документом является ГОСТ 18963-73. В нем зафиксированы способы бактериологического анализа воды, которая используется для питья.

В этом документе прописаны:

1. способы отбора проб воды для исследования;
2. правила их хранения;
3. правила перевозки в лаборатории.

Также в ГОСТе прописана применяемая при теста аппаратура. Указаны используемые реактивы вместе с питательными средами. Подробно прописана подготовка к исследованию, сама процедура анализа.

• Применяется и ГОСТ 24849-2014. В этом стандарте прописаны методики бактериологического исследования воды в полевых условиях.
• Некоторые положения касательно анализа воды на наличие микроорганизмов зафиксированы в ГОСТе Р 51232-98. Там прописаны способы бактериологического исследования воды для питьевых нужд.
• В СанПиН 2.1.4 1074 01 зафиксированы требования касательно качества воды, идущей на питьевые нужды. В документе содержатся нормативы по бактериологическому составу питьевой воды, согласно которым она может считаться безопасной.

На наличие каких бактерий проводится тест?

В процессе анализа вода исследуется на две разновидности микроорганизмов:

• Первая из них – колиформные. Это бактерии, которые принадлежат к разным видам кишечной палочки.
• Вторая разновидность – термотолерантные колиформные микроорганизмы или фекальные бактерии, хорошо размножающиеся при температуре в 43-45 0 С.

Применяемое оборудование

При исследовании используется такое оборудования:

• банки с широким горлышком;
• стеклянные воронки;
• конусовидные колбы;
• колбы вместе с тубусом;
• стеклянные флаконы;
• лабораторная посуда;
• пипетки;
• цилиндры;
• бактериологические пробирки;
• спиртовки;
• лабораторные стаканы;
• покровные и предметные стекла;
• бактериологические чаши;
• пробирные поплавки;
• электрический автоклав;
• фильтровальные аппараты;
• кристаллизаторы;
• вакуумный насос;
• лабораторные весы.

Для анализа также используется водоструйный насос. Применяется его лабораторный вариант, выполненный из стекла. Используется водяная баня. Обязательным элементом является биологический микроскоп.

Применяются также:

1. осветители;
2. металлические пеналы;
3. сигнальные часы;
4. сетчатые пластины;
5. увеличительные лупы;
6. pH-метры (для измерения кислотности);
7. дистилляторы.

Дополнительно используются:

• электрические термостаты, они предназначены для выращивания микроорганизмов при определенной температуре.
• счетный прибор для измерения выращенных колоний бактерий и сушильные шкафы.

Забор и транспортировка

Для проведения исследования требуется правильно подготовить воду. Ее забор делается по схеме:

1. Берется только стерильная бутылка.
2. Водопроводный кран, откуда будет делаться забор воды, предварительно обжигается.
3. Из крана на протяжении 7-10 минут должна сливаться вода. Только после этого ее можно набирать в стерильную емкость.
4. Тара наполовину набирается водой, закрывается пробкой и перевозится в лабораторию. При этом вода при доставке к месту анализа не должна контактировать со стерильной пробкой.

Сам анализ проводится по следующему плану:

1. Осуществляют подготовку лабораторной посуды и всех материалов. Вся посуда стерилизуется, промывается и тщательно сушится. Стерилизация происходит в сушильном шкафу. Температура внутри него должна быть порядка 160-165 0 С. Посуда обрабатывается сухим жаром на протяжении часа. Вместо сушильного шкафа может применяться автоклав. В нем температура ниже – порядка 126 0 С. Обработка длится полчаса.
2. Простерилизованную посуду вынимают из шкафа только после того, когда он остынет до температурных значений меньше 60 0 С.
3. Обработанную посуду помещают в лабораторные шкафы. Они должны плотно закрываться.
4. Готовят стерильную воду. Сначала исследуемая вода разливается по флаконам, которые закрываются пробками. После этого флаконы с водой стерилизуются в автоклаве в течение 20 минут при температуре 120 0 С. Такая вода пригодна для использования в течение 2 недель.
5. Готовят питательную среду. Ее компонентами может быть как мясной бульон, так и глюкоза, лактоза или фильтрованная желчь скота.
6. Готовят химические реактивы для конкретного анализа.
7. Подготовленную питательную среду ставят на водяную баню, после чего охлаждают до 45-50 0 С.
8. Расставляют стерильные чаши с пометками.
9. Берут несколько проб питательной среды и делают два посева в стерильные чаши.
10. Колбы со взятой для анализа воды открывают, обжигают их горлышки и немного продувают их воздухом через пипетку. Она должна быть стерильной.
11. Чистой палочкой делается забор воды. Она добавляется в стерильные чаши, которые закрываются пробкой.
12. Взятая вода заливается остуженным питательным раствором. Чаша со смесью быстро перемешивается вращательными движениями. Далее чаша ставится на ровную поверхность. Смесь внутри нее должна застыть.
13. Чаша с застывшим раствором переворачивается вверх дном и ставится в термостат. Там создается оптимальная среда для выращивания посевов (37 0 С). Чаша находится в термостате сутки.
14. Чаша с выращенными колониями микроорганизмов кладется на затемненный фон вверх дном. При помощи лупы делается подсчет количества появившихся колоний бактерий. При подсчетах учитывается число микроорганизмов на 1 см 3 взятой для анализа воды.
15. Результаты фиксируются в протоколе и регистрационном журнале. Дополнительно фиксируются особые условия, при которых проходил анализ.

Стоимость

Примерная цена процедуры для предприятий составляет 6-8 тысяч рублей. Физические лица могут заказать исследования примерно за 2 тысячи рублей.

Очистка от обнаруженных бактерий

Очистка воды происходит в несколько этапов. При наличии в ней бактерий применяется хлорирование. Также она очищается путем добавления в нее ионов серебра.

Еще одним эффективным методом является угольная сорбция. В воду добавляется активированный уголь, который поглощает опасные примеси.

Также для очистки воды от бактерий применяется ее ультрафиолетовое обеззараживание при помощи ламп и озонирование, в ходе которого вода очищается осушенным воздухом.

Заключение

Бактериологический анализ воды – способ оценки количества и конкретного вида присутствующих в ней бактерий. Основная цель процедуры – оценка качества воды и проверка ее безопасности.

Чаще всего исследуется водопроводная и речная вода, а также вода из колодцев. Если исследование показало наличие бактерий в воде, то ее очищают методами хлорирования, озонирования, угольной сорбции, ультрафиолетового обеззараживания.